大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
0.5µg/L - 12µg/L
使用目的：
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）含量。
實驗原理
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）水平。 用純化的大鼠Ⅱ型
膠原（Col Ⅱ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅱ型膠原（Col
Ⅱ），再與HRP 標記的Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過
*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化
成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波
長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（24µg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
12µg/L 5 號標準品 150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
6µg/L 4 號標準品 150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
3µg/L 3 號標準品 150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
1.5µg/L 2 號標準品 150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
0.75µg/L 1 號標準品 150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔、
待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個月
